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二、校准
    现代多参数血液分析仪的校准主要通过调整每个同道的稀释因子和信号强度达到。目前，至少有6个参数需要调整，包括白细胞计数、红细胞计数、红细胞压积或MCV、血红蛋白浓度、血小板计数和白细胞分类。
    调整方法有两种：一是采用参考方法定值的新鲜血液，与仪器测定值进行比较；二是采用中间物质，如校准品，一种稳定化的血液，通过测定相对于全血的回收率，得到恰当的校准值。无论何种方法，首先必须建立每个参数参考方法/标准品，得到全血标本的参考值。参考方法和参考品由标准化组织建立，如ICSH或NCCLS。
    表1列举了血液分析仪的参考方法。可见，部分参数有一种以上参考方法，部分没有参考方法或待建立。这是造成不同仪器间偏倚因不同参考方法而异，虽然这些差异是很细微的。

    1.血红蛋白量：ICSH，1978年，1996年。NCCLS和ICSH均推荐的参考方法，测定溶解红细胞中血红蛋白转化成氰化高铁血红蛋白的吸光度。
    2.血细胞压积：ICSH，1980年，2001年。ICSH参考方法采用Wintrobe管，纠正残留血浆。NCCLS采用微量管，不纠正残留血浆。因为在口径小的试管中残留血浆少，两者之间差约1%左右。
    3.白细胞分类计数：NCCLS，1992年。NCCLS白细胞分类参考方法H20-A，用Romanowsky染色，镜下分析400个白细胞。
    4.红细胞计数，ICSH，1994年。红细胞计数参考方法用特定的半自动血细胞计数仪，测定固定容量的颗粒数（利用Coulter ZBI的电子细胞计数仪符合该标准）。用等渗缓冲生理盐水作1/50000倍稀释，测量和纠正重合误差。
    单通道计数仪，能用于检测通过小孔的红细胞、白细胞，小孔为100μm和70μm，其长度：直径比率为1。用水平压力计控制稀释细胞悬液的流量为1ml，与脉冲分析仪连接，设置阈值下限，微型计算机采集数据纠正重合误差。对于新鲜血和乳胶颗粒重复测定精度可达0.35%。
    5.白细胞计数：ICSH，1994年。用Coulter ZBI法计数。只作一次稀释，加入Zapoglobin后在1-5分钟内计数。
     6.血小板计数：ICSH，2001年。用流式细胞仪法，间接法计数血小板。采用EDTA抗凝全血，加特异性荧光标单抗（CD41和CD61）染色血小板，被染色血小板在流式细胞仪上根据荧光强度和散射光，得出PLT和RBC比率，通过准确计数RBC，就可算得准确的血小板值。计数至少50000个血小板，精度可达2%。用血细胞计数盘直接计数血小板的方法，因为计数盘误差为1%，若计数500个血小板，精度为5%。
    目前，稳定参考品仍然未定。ACD或CPD抗凝血液可作为控制品，室间质评样品和短期校准品。因只能稳定数周，不符合国际参考标准的基本性能。另一方面，固定血细胞能稳定数年，但其密度、变形性、形态和流变性能会影响它们在计数系统中的行为，需形状因子纠正才能与新鲜血有可比性。“形状因子”主要影响红细胞，新鲜红细胞在通过计数系统时，呈纺锤形，而固定红细胞呈铜钱形。但是，计数系统中，新鲜白细胞和血小板保持球形，固定也不影响形态，其形状因子为1.0。稳定胶乳颗粒有同样的局限性，优点是可根据颗粒的特定大小生产单一的颗粒，且标准差极小。ICSH和欧盟参考BCR标准局建立了3批特别精度的胶乳颗粒，在显微镜下，用经校准标尺测得直径分别为2.23,4.8和9.445μm,呈球形，计算体积为5.8,58和441fL，此物质能直接溯源到一级长度计量标准。在颗粒计数仪中，形状因子由真实体积和测定体积的差异得出。结果见表2。

表2　参考仪器和常规仪器的形状因子计算

    理论上，胶乳制剂能用于校准一级参考仪器，然后用于新鲜血液或稳定血液的定值。以此调节所有计数仪，给出可比结果，所用校准品必须溯源到一级参考标准。国际上，测量结果的溯源链模式如下图左(图略)。在血液细胞计数方面，生产厂家的校准品溯源链模式如下图右(图略)。摘自《2003年华东区临床检验中心协作组临床实验室质量管理
及新技术应用高级研讨会资料汇编》